Uchimbaji wa Mazao ya GMO & Kitengo cha Kuboresha

Inafaa haswa kwa uchimbaji wa Mazao ya GMO na kugundua PCR ya transgenic.

Utengenezaji wa Mazao ya GMO & Kitengo cha Kujiongezea kimetengenezwa mahsusi kwa kugundua PCR ya mazao ya GMO. Baiskeli ya kipekee ya lysis iliyo katika Sehemu ya A ya kit inaweza hasa kutuliza tishu za mazao makuu - ngano, mahindi, mchele, pamba na soya, kutoa vitu vinavyohusiana kama vile asidi ya kiini na protini. Uchimbaji wa phenol / chloroform pamoja na RNase maalum inaweza kutakasa DNA safi ya genomic bila uchafu kama RNA, protini na ioni za chuma. DNA iliyosafishwa inaweza kutumika katika kugundua PCR inayofuata. Sehemu B ya kit ni sehemu mbili mfumo rahisi wa athari ya PCR iliyo na 2 × GMO PCR Buffer na GMO DNA Polymerase. GMO DNA Polymerase ni polymerase inayoweza kurekebishwa iliyobadilishwa na kingamwili. 2 × GMO PCR Buffer ina vifaa anuwai kama MgCl₂, dNTPs, PCR stabilizer, optimizer na enhancer katika mkusanyiko wa 2 × GMO. Ina faida ya operesheni ya haraka na rahisi, unyeti wa hali ya juu, upendeleo wenye nguvu, utulivu mzuri, nk Inaweza kutumiwa pamoja na Sehemu ya A kwa utambuzi wa mazao ya GMO ya GMO.

Paka. Hapana	Ukubwa wa Ufungashaji
4992905	200 rxn

Tuma barua pepe kwetu

Maelezo ya Bidhaa

Mfano wa Majaribio

Maswali Yanayoulizwa Sana

Vitambulisho vya Bidhaa

Vipengele

■ Utekelezaji mpana: Kiti hiki kinaweza kutoa DNA ya ubora wa juu kutoka kwa mazao makuu matano ya GMO.
■ Rahisi na haraka: Uchimbaji wa chembe za urithi wa GMO unaweza kukamilika ndani ya masaa 2. Hakuna haja ya centrifuges kubwa zilizohifadhiwa, mahitaji ya chini ya vyombo na vifaa. Inafaa kwa uchimbaji wa haraka wa genomic ya DNA ya mazao ya GMO katika ngazi zote za taasisi za utafiti.
■ Ufanisi wa hali ya juu na umaalum: Bafa ya kipekee ya Taq polymerase iliyobadilishwa na antibody inahakikisha kukuza kwa ufanisi polymerase, ambayo ni maalum zaidi kuliko Taq polymerase ya kawaida.

Maombi

Chombo hicho kinaweza kutoa DNA ya genomic ya hali ya juu kutoka kwa mazao makuu ya GMO kama ngano, mahindi, mchele, pamba na soya, na kufanya kugundua PCR kwa mazao ya GMO.

Bidhaa zote zinaweza kuboreshwa kwa ODM / OEM. Kwa maelezo,tafadhali bofya Huduma iliyoboreshwa (ODM / OEM)

Iliyotangulia: FastKing Hatua Moja RT-qPCR Kit (Probe)

Ifuatayo: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

	Uchimbaji wa DNA ya Genomic Uchimbaji wa DNA ya Genomic ulifanywa kwa majani ya 100 mg ya mchele, mahindi, soya, pamba na ngano, mtawaliwa. Jaribio lilirudiwa mara mbili. 3 μl DNA kutoka jumla ya 100 μl eluents ilipakiwa kwa kila njia. Mkusanyiko wa gel ya agarose ilikuwa 2%. Electrophoresis ilifanywa chini ya 6 V / cm kwa dakika 20. D15000: TIANGEN D15000 Alama ya DNA.
	Ugunduzi wa PCR Genomic DNA ya mchele, mahindi, soya, pamba na ngano ziliongezwa, mtawaliwa. Jaribio lilirudiwa mara mbili. 6 μl kutoka jumla ya 20 μl mfumo wa mmenyuko ulipakiwa kwa kila njia. Mkusanyiko wa gel ya agarose ilikuwa 2%. Electrophoresis ilifanywa chini ya 6 V / cm kwa dakika 20. D15000: TIANGEN D15000 Alama ya DNA.

Swali: Hakuna bendi za kukuza

Kiolezo cha A-1

■ Kiolezo kina uchafu wa protini au vizuizi vya Taq, n.k. —Safisha templeti ya DNA, ondoa uchafu wa protini au dondoo la templeti na vifaa vya utakaso.

■ Uwekaji wa templeti haujakamilika - - Ongeza sawasawa joto la kujitolea na kuongeza muda wa kutengana.

■ Uharibifu wa kiolezo ——Tayarisha kiolezo.

Utangulizi wa A-2

Quality Ubora duni wa vichangamsha — -Tengeneza upya kitangulizi.

■ Uharibifu wa vianzio - —Pokea viwango vya juu vya mkusanyiko kuwa kiasi kidogo cha kuhifadhi. Epuka kufungia na kuyeyusha au muda mrefu wa 4 ° C iliyohifadhiwa.

■ Ubunifu usiofaa wa vichungi (k.v.

Mg-3 Mg²⁺mkusanyiko

■ Mg²⁺ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg²⁺mkusanyiko: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

Joto la A-4 la kujifunga

■ Joto la juu la kuambatisha huathiri kumfunga primer na templeti. - Punguza joto linalounganisha na kuongeza hali hiyo kwa gradient ya 2 ° C.

Wakati wa ugani wa -5

■ Muda mfupi wa ugani - - Ongeza muda wa ugani.

Swali: Chanya ya uwongo

Phenomena: Sampuli hasi pia zinaonyesha bendi za mlolongo wa lengo.

Uchafuzi wa A-1 wa PCR

■ Uchafuzi wa msalaba wa mlolongo wa shabaha au bidhaa za kukuza —— Kwa uangalifu usiweke bomba sampuli iliyo na mlolongo wa shabaha kwenye sampuli hasi au umwagike nje ya bomba la centrifuge. Vitendanishi au vifaa vinapaswa kuchomwa moto ili kuondoa asidi za kiini zilizopo, na uwepo wa uchafuzi unapaswa kuamua kupitia majaribio mabaya ya kudhibiti.

■ Ukolezi wa vitendanishi - —Pokea vitendanishi na uvihifadhi kwa joto la chini.

A-2 Mkuur

■ Mg²⁺ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg²⁺ mkusanyiko: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

■ Ubunifu wa vianzio visivyo sahihi, na mlolongo wa malengo una homolojia na mlolongo usiolenga. —- Tengeneza upya viboreshaji.

Swali: Ukuzaji usio maalum

Phenomena: Bendi za kukuza PCR haziendani na saizi inayotarajiwa, iwe kubwa au ndogo, au wakati mwingine bendi zote za kukuza na bendi zisizo maalum za kukuza hufanyika.

Utangulizi wa A-1

■ Upendeleo duni wa mwanzo

- - Kubuni upya primer.

■ Mkusanyiko wa kiwango cha juu ni cha juu sana - - Ongeza vizuri joto la kutengana na kuongeza muda wa kutengana.

Mg-A-2 Mg²⁺ mkusanyiko

■ Mg²⁺ mkusanyiko ni mkubwa sana — -Punguza vizuri mkusanyiko wa Mg2 +: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

A-3 polymerase inayoweza kutibika

■ Kiasi cha enzyme nyingi - - Punguza kiwango cha enzyme ipasavyo kwa vipindi vya 0.5 U.

Joto la A-4 la kujifunga

■ Joto la kufunika ni la chini sana — - Ongeza vizuri joto la kuambatanisha au tumia njia mbili za kuziba

Mizunguko ya PC-A-5

■ Mizunguko mingi sana ya PCR ——Punguza idadi ya mizunguko ya PCR.

Swali: Patchy au smear bendi

Utangulizi wa A-1——Upekee wa umaskini ——Buni upya kitangulizi, badilisha msimamo na urefu wa kitangulizi ili kuongeza umaalum wake; au fanya PCR iliyohifadhiwa.

Kiini-2 cha DNA

——Template sio safi - -Takasa kiolezo au toa DNA na vifaa vya utakaso.

Mg-3 Mg²⁺ mkusanyiko

——Ma²⁺ mkusanyiko ni mkubwa sana -—Punguza ipasavyo Mg²⁺ mkusanyiko: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

A-4 dNTP

—— Mkusanyiko wa dNTP ni kubwa mno —— Punguza mkusanyiko wa dNTP ipasavyo

Joto la kujumlisha A-5

—— Joto la chini kabisa la kuambatisha —— Ongeza vizuri joto linalounganisha

Mzunguko wa A-6

——Mizunguko mingi sana —— Ongeza idadi ya mzunguko

Swali: Kiasi kipi cha DNA kinapaswa kuongezwa katika mfumo wa mmenyuko wa PCR 50 μl?

Swali: Jinsi ya kukuza vipande virefu?

Hatua ya kwanza ni kuchagua polymerase inayofaa. Taq polymerase ya kawaida haiwezi kusahihisha kwa sababu ya ukosefu wa shughuli ya msamaha ya 3'-5, na kutofanana kutapunguza sana ufanisi wa ugani wa vipande. Kwa hivyo, polymerase ya kawaida ya Taq haiwezi kukuza vyema vipande vya lengo kubwa kuliko 5 kb. Taq polymerase iliyo na muundo maalum au uaminifu mwingine wa hali ya juu inapaswa kuchaguliwa ili kuboresha ufanisi wa ugani na kukidhi mahitaji ya kukuza kipande kirefu. Kwa kuongezea, ukuzaji wa vipande virefu pia inahitaji marekebisho yanayolingana ya muundo wa mwanzo, muda wa kujitolea, muda wa ugani, pH ya bafa, nk Kawaida, viboreshaji vyenye 18-24 bp vinaweza kusababisha mavuno bora. Ili kuzuia uharibifu wa templeti, wakati wa kujitolea kwa 94 ° C unapaswa kupunguzwa hadi sekunde 30 au chini kwa kila mzunguko, na wakati wa kuongezeka kwa joto hadi 94 ° C kabla ya kukuza inapaswa kuwa chini ya dakika 1. Kwa kuongezea, kuweka joto la ugani kwa karibu 68 ° C na kubuni muda wa ugani kulingana na kiwango cha 1 kb / min kunaweza kuhakikisha ukuzaji mzuri wa vipande virefu.

Swali: Jinsi ya kuboresha uaminifu wa kukuza PCR?

Kiwango cha makosa ya kukuza PCR inaweza kupunguzwa kwa kutumia polima nyingi za DNA na uaminifu wa hali ya juu. Miongoni mwa polima zote za Taq DNA zilizopatikana hadi sasa, enzyme ya Pfu ina kiwango cha chini kabisa cha makosa na uaminifu wa hali ya juu (angalia jedwali lililoambatanishwa). Mbali na uteuzi wa enzyme, watafiti wanaweza kupunguza zaidi kiwango cha mabadiliko ya PCR kwa kuboresha hali ya athari, pamoja na kuongeza muundo wa bafa, mkusanyiko wa polymerase inayoweza kutibika na kuongeza idadi ya mzunguko wa PCR.

Andika ujumbe wako hapa na ututumie