2 × Pfu PCR Mchanganyiko

Uaminifu wa hali ya juu kabisa wa Taq DNA polymerase.

Pfu DNA Polymerase imeonyeshwa kutoka kwa E. coli na jeni la Pyrococus Furiosis DNA Polymerase na iliyosafishwa na kutengwa na utakaso wa safu nyingi. Kwa sababu Pfu ana shughuli ya msamaha ya 3'-5 ", inaweza kusoma katika mchakato wa kukuza DNA, wakati Taq DNA Polymerase ya jadi haiwezi. Ijapokuwa polima nyingine za Taq DNA kama vile Vent, Deep Vent, Tli, UITma, nk zina kazi za kusahihisha, Pfu ina kiwango cha chini kabisa cha kutofautisha kati ya polima zote za Taq DNA zilizopatikana hadi sasa. Pfu DNA Polymerase ina utulivu mzuri wa mafuta kuliko Taq DNA polymerase ya kawaida, na inaweza kudumisha zaidi ya shughuli 90% kwa 95 ° C kwa saa 1.

Mchanganyiko mmoja wa Pfu PCR Mchanganyiko (Udhibitisho wa Bidhaa ya Juu ya Teknolojia ya Kitaifa)

■ Mchanganyiko wa Pfu PCR umeboresha upekee na unyeti wa athari ya PCR na inaweza kukuza templeti tata zilizo na yaliyomo juu ya GC, muundo wa sekondari na kadhalika. Kwa nakala 2 tu za templeti lengwa inaweza kukuzwa, kuhakikisha matokeo sahihi zaidi ya majaribio.

■ Fomula ya kipekee ya Pfu MasterMix inafanya mfumo mzima wa athari kuwa thabiti sana, na shughuli haitaathiriwa na kufungia mara kwa mara au kuhifadhi muda mrefu kwa 4 ° C.

■ Suluhisho la mchanganyiko wa PCR thabiti na bora linaweza kufanya operesheni haraka na rahisi, ikipunguza sana nguvu ya wafanyikazi na makosa ya sampuli. Kiboreshaji cha juu cha utendaji wa PCR na optimizer pia imejumuishwa kwenye mchanganyiko, ambayo hupunguza mahitaji ya hali ya PCR.

■ Bidhaa hii ina mifumo iliyo na rangi na isiyo na rangi. Bidhaa zenye mchanganyiko wa rangi ya PCR zinaweza kuchomwa moja kwa moja baada ya PCR, bila kuongeza bafa ya sampuli.

Paka. Hapana Ukubwa wa Ufungashaji
4992780 1ml
4992781 5 * 1ml
4992782 1ml
4992906 5 * 1ml

Maelezo ya Bidhaa

Utiririshaji wa kazi

Maswali Yanayoulizwa Sana

Vitambulisho vya Bidhaa

Ufafanuzi wa Shughuli

Shughuli ya kitengo 1 (U) Pfu DNA Polymerase hufafanuliwa kama kiwango cha enzyme inayohitajika kuingiza 10 nmol deoxynucleotides katika vitu visivyo na asidi katika 74 ° C ndani ya dakika 30 kwa kutumia manii ya laum iliyoamilishwa kama template / primer.

Udhibiti wa Ubora

Usafi na kugundua kwa SDS-PAGE ni zaidi ya 99%; Hakuna shughuli ya nuclease ya nje inayogunduliwa; Jeni ya nakala moja katika genome ya mwanadamu inaweza kukuzwa vyema; Hakuna mabadiliko muhimu ya shughuli wakati wa kuhifadhiwa kwenye joto la kawaida kwa wiki moja.

Vigezo kuu vya Ufundi

Ina shughuli ya msamaha ya 3'-5 "na hakuna shughuli ya msamaha ya 5'-3". Kasi ya upanuzi wa ukuzaji wa DNA ni ya chini kuliko ile ya Taq polymerase, na kwa ujumla kasi ya ugani wa enzyme ya Pfu ni 0.5-1 kb kwa dakika. Utulivu wa joto wa Pfu ni bora kuliko Taq. Kwa templeti zilizo na yaliyomo kwenye kiwango cha juu cha GC, joto la kujitolea linaweza kuongezeka hadi 98 ° C, ambayo haina athari kwa shughuli ya Pfu polymerase. Bidhaa ya PCR imekamilika butu, ambayo inaweza kuongezwa na overhangs 3'-dA kabla ya kushikamana na vector ya TA au iliyosanikishwa na vector iliyomalizika butu.

Maombi

Inaweza kutumika kwa kukuza uaminifu wa juu wa DNA, kama vile ujumuishaji wa jeni, mabadiliko ya tovuti, uchambuzi wa nyukleotidi moja (SNP) na kumaliza kukarabati.

Bidhaa zote zinaweza kuboreshwa kwa ODM / OEM. Kwa maelezo,tafadhali bofya Huduma iliyoboreshwa (ODM / OEM)


  • Iliyotangulia:
  • Ifuatayo:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example Tumia genomic DNA kama kiolezo kukuza kipande cha 1kb.
    Baada ya athari ya PCR, chukua 5 μl kwa kugundua electrophoresis.
    Swali: Hakuna bendi za kukuza

    Kiolezo cha A-1

    ■ Kiolezo kina uchafu wa protini au vizuizi vya Taq, n.k. —Safisha templeti ya DNA, ondoa uchafu wa protini au dondoo la templeti na vifaa vya utakaso.

    ■ Uwekaji wa templeti haujakamilika - - Ongeza sawasawa joto la kujitolea na kuongeza muda wa kutengana.

    ■ Uharibifu wa kiolezo ——Tayarisha kiolezo.

    Utangulizi wa A-2

    Quality Ubora duni wa vichangamsha — -Tengeneza upya kitangulizi.

    ■ Uharibifu wa vianzio - —Pokea viwango vya juu vya mkusanyiko kuwa kiasi kidogo cha kuhifadhi. Epuka kufungia na kuyeyusha au muda mrefu wa 4 ° C iliyohifadhiwa.

    ■ Ubunifu usiofaa wa vichungi (k.v.

    Mg-3 Mg2+mkusanyiko

    ■ Mg2+ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    Joto la A-4 la kujifunga

    ■ Joto la juu la kuambatisha huathiri kumfunga primer na templeti. - Punguza joto linalounganisha na kuongeza hali hiyo kwa gradient ya 2 ° C.

    Wakati wa ugani wa -5

    ■ Muda mfupi wa ugani - - Ongeza muda wa ugani.

    Swali: Chanya ya uwongo

    Phenomena: Sampuli hasi pia zinaonyesha bendi za mlolongo wa lengo.

    Uchafuzi wa A-1 wa PCR

    ■ Uchafuzi wa msalaba wa mlolongo wa shabaha au bidhaa za kukuza —— Kwa uangalifu usiweke bomba sampuli iliyo na mlolongo wa shabaha kwenye sampuli hasi au umwagike nje ya bomba la centrifuge. Vitendanishi au vifaa vinapaswa kuchomwa moto ili kuondoa asidi za kiini zilizopo, na uwepo wa uchafuzi unapaswa kuamua kupitia majaribio mabaya ya kudhibiti.

    ■ Ukolezi wa vitendanishi - —Pokea vitendanishi na uvihifadhi kwa joto la chini.

    A-2 Mkuur

    ■ Mg2+ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    ■ Ubunifu wa vianzio visivyo sahihi, na mlolongo wa malengo una homolojia na mlolongo usiolenga. —- Tengeneza upya viboreshaji.

    Swali: Ukuzaji usio maalum

    Phenomena: Bendi za kukuza PCR haziendani na saizi inayotarajiwa, iwe kubwa au ndogo, au wakati mwingine bendi zote za kukuza na bendi zisizo maalum za kukuza hufanyika.

    Utangulizi wa A-1

    ■ Upendeleo duni wa mwanzo

    - - Kubuni upya primer.

    ■ Mkusanyiko wa kiwango cha juu ni cha juu sana - - Ongeza vizuri joto la kutengana na kuongeza muda wa kutengana.

    Mg-A-2 Mg2+ mkusanyiko

    ■ Mg2+ mkusanyiko ni mkubwa sana — -Punguza vizuri mkusanyiko wa Mg2 +: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    A-3 polymerase inayoweza kutibika

    ■ Kiasi cha enzyme nyingi - - Punguza kiwango cha enzyme ipasavyo kwa vipindi vya 0.5 U.

    Joto la A-4 la kujifunga

    ■ Joto la kufunika ni la chini sana — - Ongeza vizuri joto la kuambatanisha au tumia njia mbili za kuziba

    Mizunguko ya PC-A-5

    ■ Mizunguko mingi sana ya PCR ——Punguza idadi ya mizunguko ya PCR.

    Swali: Patchy au smear bendi

    Utangulizi wa A-1——Upekee wa umaskini ——Buni upya kitangulizi, badilisha msimamo na urefu wa kitangulizi ili kuongeza umaalum wake; au fanya PCR iliyohifadhiwa.

    Kiini-2 cha DNA

    ——Template sio safi - -Takasa kiolezo au toa DNA na vifaa vya utakaso.

    Mg-3 Mg2+ mkusanyiko

    ——Ma2+ mkusanyiko ni mkubwa sana -—Punguza ipasavyo Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    A-4 dNTP

    —— Mkusanyiko wa dNTP ni kubwa mno —— Punguza mkusanyiko wa dNTP ipasavyo

    Joto la kujumlisha A-5

    —— Joto la chini kabisa la kuambatisha —— Ongeza vizuri joto linalounganisha

    Mzunguko wa A-6

    ——Mizunguko mingi sana —— Ongeza idadi ya mzunguko

    Swali: Kiasi kipi cha DNA kinapaswa kuongezwa katika mfumo wa mmenyuko wa PCR 50 μl?
    ytry
    Swali: Jinsi ya kukuza vipande virefu?

    Hatua ya kwanza ni kuchagua polymerase inayofaa. Taq polymerase ya kawaida haiwezi kusahihisha kwa sababu ya ukosefu wa shughuli ya msamaha ya 3'-5, na kutofanana kutapunguza sana ufanisi wa ugani wa vipande. Kwa hivyo, polymerase ya kawaida ya Taq haiwezi kukuza vyema vipande vya lengo kubwa kuliko 5 kb. Taq polymerase iliyo na muundo maalum au uaminifu mwingine wa hali ya juu inapaswa kuchaguliwa ili kuboresha ufanisi wa ugani na kukidhi mahitaji ya kukuza kipande kirefu. Kwa kuongezea, ukuzaji wa vipande virefu pia inahitaji marekebisho yanayolingana ya muundo wa mwanzo, muda wa kujitolea, muda wa ugani, pH ya bafa, nk Kawaida, viboreshaji vyenye 18-24 bp vinaweza kusababisha mavuno bora. Ili kuzuia uharibifu wa templeti, wakati wa kujitolea kwa 94 ° C unapaswa kupunguzwa hadi sekunde 30 au chini kwa kila mzunguko, na wakati wa kuongezeka kwa joto hadi 94 ° C kabla ya kukuza inapaswa kuwa chini ya dakika 1. Kwa kuongezea, kuweka joto la ugani kwa karibu 68 ° C na kubuni muda wa ugani kulingana na kiwango cha 1 kb / min kunaweza kuhakikisha ukuzaji mzuri wa vipande virefu.

    Swali: Jinsi ya kuboresha uaminifu wa kukuza PCR?

    Kiwango cha makosa ya kukuza PCR inaweza kupunguzwa kwa kutumia polima nyingi za DNA na uaminifu wa hali ya juu. Miongoni mwa polima zote za Taq DNA zilizopatikana hadi sasa, enzyme ya Pfu ina kiwango cha chini kabisa cha makosa na uaminifu wa hali ya juu (angalia jedwali lililoambatanishwa). Mbali na uteuzi wa enzyme, watafiti wanaweza kupunguza zaidi kiwango cha mabadiliko ya PCR kwa kuboresha hali ya athari, pamoja na kuongeza muundo wa bafa, mkusanyiko wa polymerase inayoweza kutibika na kuongeza idadi ya mzunguko wa PCR.

    Andika ujumbe wako hapa na ututumie