Kitengo cha PCR nyingi

Shughuli ya kiwango cha juu na upeo wa juu wa Taq DNA polymerase.

Multi PCR Kit ni bidhaa iliyoundwa kwa PCR ya multiplex. Multi HotStart DNA Polymerase iliyo kwenye kit ni kemikali iliyobadilishwa na ndio polima bora zaidi ya HotStart iliyopatikana hadi sasa. Uvumbuzi huo unawezesha jozi nyingi za utangulizi wa PCR kufanya ukuzaji mzuri katika mfumo huo wa athari na athari za PCR nyingi zinaweza kufanywa kwa busara.

Paka. Hapana Ukubwa wa Ufungashaji
4992787 5 U × 50 rxn
4992788 5 U × 50 rxn

Maelezo ya Bidhaa

Mifano ya Majaribio

Maswali Yanayoulizwa Sana

Vitambulisho vya Bidhaa

Vipengele

■ Ubora wa hali ya juu: Enzyme iliyobadilishwa kikemikali ya kuanza-moto na wakati wa uanzishaji hadi dakika 15 ili kuhakikisha ukuzaji wa hali ya juu.
■ Usikivu wa hali ya juu: Kuongeza nakala ya chini na kuongeza kasi ya ufanisi wa PCR nyingi.
■ Operesheni rahisi: Enzimu haifanyi kazi kwa joto la chini na joto la kawaida, na reagent inaweza kutayarishwa kwa joto la kawaida.

Ufafanuzi wa Shughuli

Kitengo 1 (U) HotStart Taq DNA Polymerase shughuli hufafanuliwa kama kiwango cha enzyme inayohitajika kuingiza 10 nmol deoxynucleotides katika vitu visivyo na asidi katika 74 ℃ ndani ya dakika 30 kwa kutumia manii ya laum iliyoamilishwa kama template / primer.

Vigezo kuu vya Ufundi

Inayo shughuli ya msamaha ya 5'-3 "na hakuna shughuli ya msamaha ya 3-5-na uwezo maalum. Mwisho wa 3 wa bidhaa ya PCR ni A, ambayo inaweza kutumika moja kwa moja kwa uundaji wa TA.

Ufafanuzi

Aina: HotStart DNA polymerase iliyobadilishwa na kemikali
Maombi: Jaribio la PCR la Multiplex, jaribio la kugundua upeo wa hali ya juu, ukuzaji wa jeni la nakala ya chini, ukuzaji wa PCR wa templeti zilizo na miundo tata (kama DNA ya genomic, cDNA, nk).

Bidhaa zote zinaweza kuboreshwa kwa ODM / OEM. Kwa maelezo,tafadhali bofya Huduma iliyoboreshwa (ODM / OEM)


  • Iliyotangulia:
  • Ifuatayo:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Experimental Example Tumia genome ya kibinadamu kama templeti kukuza vipande 7 tofauti (100 bp-1000 bp)
    Kumbuka:
    ① Uamuzi wa muda wa ugani wa kukuza urefu tofauti katika PCR ya multiplex: Kwa vipande chini ya 500 bp, panua kwa sekunde 60; Kwa vipande vya 500-1500 bp, panua kwa sekunde 90; Kwa vipande zaidi ya 2000 bp, panua kwa sekunde 120.
    Hot Kuanza moto inahitaji joto kwa 95 ° C kwa dakika 15 ili kuhakikisha kutolewa kwa kutosha kwa shughuli za enzyme.
    Swali: Hakuna bendi za kukuza

    Kiolezo cha A-1

    ■ Kiolezo kina uchafu wa protini au vizuizi vya Taq, n.k. —Safisha templeti ya DNA, ondoa uchafu wa protini au dondoo la templeti na vifaa vya utakaso.

    ■ Uwekaji wa templeti haujakamilika - - Ongeza sawasawa joto la kujitolea na kuongeza muda wa kutengana.

    ■ Uharibifu wa kiolezo ——Tayarisha kiolezo.

    Utangulizi wa A-2

    Quality Ubora duni wa vichangamsha — -Tengeneza upya kitangulizi.

    ■ Uharibifu wa vianzio - —Pokea viwango vya juu vya mkusanyiko kuwa kiasi kidogo cha kuhifadhi. Epuka kufungia na kuyeyusha au muda mrefu wa 4 ° C iliyohifadhiwa.

    ■ Ubunifu usiofaa wa vichungi (k.v.

    Mg-3 Mg2+mkusanyiko

    ■ Mg2+ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    Joto la A-4 la kujifunga

    ■ Joto la juu la kuambatisha huathiri kumfunga primer na templeti. - Punguza joto linalounganisha na kuongeza hali hiyo kwa gradient ya 2 ° C.

    Wakati wa ugani wa -5

    ■ Muda mfupi wa ugani - - Ongeza muda wa ugani.

    Swali: Chanya ya uwongo

    Phenomena: Sampuli hasi pia zinaonyesha bendi za mlolongo wa lengo.

    Uchafuzi wa A-1 wa PCR

    ■ Uchafuzi wa msalaba wa mlolongo wa shabaha au bidhaa za kukuza —— Kwa uangalifu usiweke bomba sampuli iliyo na mlolongo wa shabaha kwenye sampuli hasi au umwagike nje ya bomba la centrifuge. Vitendanishi au vifaa vinapaswa kuchomwa moto ili kuondoa asidi za kiini zilizopo, na uwepo wa uchafuzi unapaswa kuamua kupitia majaribio mabaya ya kudhibiti.

    ■ Ukolezi wa vitendanishi - —Pokea vitendanishi na uvihifadhi kwa joto la chini.

    A-2 Mkuur

    ■ Mg2+ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    ■ Ubunifu wa vianzio visivyo sahihi, na mlolongo wa malengo una homolojia na mlolongo usiolenga. —- Tengeneza upya viboreshaji.

    Swali: Ukuzaji usio maalum

    Phenomena: Bendi za kukuza PCR haziendani na saizi inayotarajiwa, iwe kubwa au ndogo, au wakati mwingine bendi zote za kukuza na bendi zisizo maalum za kukuza hufanyika.

    Utangulizi wa A-1

    ■ Upendeleo duni wa mwanzo

    - - Kubuni upya primer.

    ■ Mkusanyiko wa kiwango cha juu ni cha juu sana - - Ongeza vizuri joto la kutengana na kuongeza muda wa kutengana.

    Mg-A-2 Mg2+ mkusanyiko

    ■ Mg2+ mkusanyiko ni mkubwa sana — -Punguza vizuri mkusanyiko wa Mg2 +: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    A-3 polymerase inayoweza kutibika

    ■ Kiasi cha enzyme nyingi - - Punguza kiwango cha enzyme ipasavyo kwa vipindi vya 0.5 U.

    Joto la A-4 la kujifunga

    ■ Joto la kufunika ni la chini sana — - Ongeza vizuri joto la kuambatanisha au tumia njia mbili za kuziba

    Mizunguko ya PC-A-5

    ■ Mizunguko mingi sana ya PCR ——Punguza idadi ya mizunguko ya PCR.

    Swali: Patchy au smear bendi

    Utangulizi wa A-1——Upekee wa umaskini ——Buni upya kitangulizi, badilisha msimamo na urefu wa kitangulizi ili kuongeza umaalum wake; au fanya PCR iliyohifadhiwa.

    Kiini-2 cha DNA

    ——Template sio safi - -Takasa kiolezo au toa DNA na vifaa vya utakaso.

    Mg-3 Mg2+ mkusanyiko

    ——Ma2+ mkusanyiko ni mkubwa sana -—Punguza ipasavyo Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    A-4 dNTP

    —— Mkusanyiko wa dNTP ni kubwa mno —— Punguza mkusanyiko wa dNTP ipasavyo

    Joto la kujumlisha A-5

    —— Joto la chini kabisa la kuambatisha —— Ongeza vizuri joto linalounganisha

    Mzunguko wa A-6

    ——Mizunguko mingi sana —— Ongeza idadi ya mzunguko

    Swali: Kiasi kipi cha DNA kinapaswa kuongezwa katika mfumo wa mmenyuko wa PCR 50 μl?
    ytry
    Swali: Jinsi ya kukuza vipande virefu?

    Hatua ya kwanza ni kuchagua polymerase inayofaa. Taq polymerase ya kawaida haiwezi kusahihisha kwa sababu ya ukosefu wa shughuli ya msamaha ya 3'-5, na kutofanana kutapunguza sana ufanisi wa ugani wa vipande. Kwa hivyo, polymerase ya kawaida ya Taq haiwezi kukuza vyema vipande vya lengo kubwa kuliko 5 kb. Taq polymerase iliyo na muundo maalum au uaminifu mwingine wa hali ya juu inapaswa kuchaguliwa ili kuboresha ufanisi wa ugani na kukidhi mahitaji ya kukuza kipande kirefu. Kwa kuongezea, ukuzaji wa vipande virefu pia inahitaji marekebisho yanayolingana ya muundo wa mwanzo, muda wa kujitolea, muda wa ugani, pH ya bafa, nk Kawaida, viboreshaji vyenye 18-24 bp vinaweza kusababisha mavuno bora. Ili kuzuia uharibifu wa templeti, wakati wa kujitolea kwa 94 ° C unapaswa kupunguzwa hadi sekunde 30 au chini kwa kila mzunguko, na wakati wa kuongezeka kwa joto hadi 94 ° C kabla ya kukuza inapaswa kuwa chini ya dakika 1. Kwa kuongezea, kuweka joto la ugani kwa karibu 68 ° C na kubuni muda wa ugani kulingana na kiwango cha 1 kb / min kunaweza kuhakikisha ukuzaji mzuri wa vipande virefu.

    Swali: Jinsi ya kuboresha uaminifu wa kukuza PCR?

    Kiwango cha makosa ya kukuza PCR inaweza kupunguzwa kwa kutumia polima nyingi za DNA na uaminifu wa hali ya juu. Miongoni mwa polima zote za Taq DNA zilizopatikana hadi sasa, enzyme ya Pfu ina kiwango cha chini kabisa cha makosa na uaminifu wa hali ya juu (angalia jedwali lililoambatanishwa). Mbali na uteuzi wa enzyme, watafiti wanaweza kupunguza zaidi kiwango cha mabadiliko ya PCR kwa kuboresha hali ya athari, pamoja na kuongeza muundo wa bafa, mkusanyiko wa polymerase inayoweza kutibika na kuongeza idadi ya mzunguko wa PCR.

    Andika ujumbe wako hapa na ututumie