2 × Taq Platinum PCR Mchanganyiko
Ufafanuzi wa Shughuli
Kitengo 1 (U) Taq Platinum DNA Polymerase shughuli hufafanuliwa kama kiwango cha enzyme inayohitajika kuingiza 10 nmol deoxynucleotides katika vitu visivyo na asidi katika 74 ° C ndani ya dakika 30 kwa kutumia manii ya laum iliyoamilishwa kama template / primer.
Udhibiti wa Ubora
Usafi na kugundua kwa SDS-PAGE ni zaidi ya 99%; Hakuna shughuli ya nuclease ya nje inayogunduliwa; Jeni ya nakala moja katika genome ya mwanadamu inaweza kukuzwa vyema; Hakuna mabadiliko muhimu ya shughuli wakati wa kuhifadhiwa kwenye joto la kawaida kwa wiki moja.
Vigezo kuu vya Ufundi
Inayo shughuli ya msamaha ya 5'-3 "na shughuli ya msamaha ya 3-5", na uaminifu wake uko karibu na Pfu polymerase. Kasi ya ugani wa Taq Platinum Polymerase ni haraka kuliko Pfu polymerase na ufanisi wa kukuza ni juu zaidi. Bidhaa za PCR zinaweza kushonwa moja kwa moja hadi mwisho butu au zilizoundwa na vector ya TA. Ikiwa ufanisi wa cloning unahitaji kuboreshwa, inashauriwa kusafisha kwanza na kuongeza overhangs 3'-dA kabla ya kujipanga kwenye vector ya TA.
Bomba moja la Taq Platinum MasterMix (Udhibitisho wa Bidhaa ya Juu ya Teknolojia ya Kitaifa)
■ Taq Platinum MasterMix imeboresha upendeleo na unyeti wa athari ya PCR na inaweza kukuza templeti tata zilizo na yaliyomo juu ya GC, muundo wa sekondari na zingine kama hizo. Kwa nakala 2 tu za templeti lengwa inaweza kukuzwa, kuhakikisha matokeo sahihi zaidi ya majaribio.
■ Fomati ya kipekee ya Taq Platinum MasterMix inafanya mfumo mzima wa athari kuwa thabiti sana, na shughuli haitaathiriwa na kufungia mara kwa mara au kuhifadhi muda mrefu saa 4 ° C.
■ Suluhisho iliyochanganywa iliyo thabiti na bora iliyoandaliwa tayari ya PCR inaweza kufanya operesheni haraka na rahisi, ikipunguza sana nguvu ya wafanyikazi na makosa ya sampuli. Kiboreshaji cha juu cha utendaji wa PCR na optimizer pia imejumuishwa kwenye mchanganyiko, ambayo hupunguza mahitaji ya hali ya PCR.
■ Bidhaa hii ina mifumo iliyo na rangi na isiyo na rangi. Bidhaa zenye MasterMix zilizo na rangi zinaweza kupigwa moja kwa moja baada ya PCR, bila kuongeza bafa ya kupakia.
Maombi
Inaweza kuchukua nafasi ya Pfu polymerase kukuza bidhaa za uaminifu wa hali ya juu kutoka kwa templeti ngumu kama jenomu, na inafaa kwa matumizi kama vile ujumuishaji wa jeni za kujieleza, mabadiliko maalum ya wavuti na uchambuzi wa polimofonimu moja ya nyukotidi (SNP), nk.
Tahadhari katika Kubuni Vitangulizi vya PCR:
Urefu wa mwanzo ni kawaida 20-25 mer. Walakini, wakati wa kufanya PCR ya kipande kirefu, urefu wa primer unapaswa kuongezeka hadi 30-35 mer.
There Hakuna uoanishaji wa nyongeza kati ya viboreshaji viwili, haswa kwa besi 3 za mwisho mwisho wa 3.
■ Maudhui ya GC yanapaswa kuwa 50-60%, na epuka tajiri wa GC au AT. Ili kutengeneza kipaza sauti na templeti funga vizuri, epuka muundo wa tajiri kwenye mwisho wa 3.
■ Epuka utangulizi kuunda muundo wa sekondari.
■ Chagua vichungi viwili vyenye joto la Tm karibu na kila mmoja.
Hesabu ya Thamani ya Tm ya Primers kwa PCR:
■ Wakati utangulizi ni chini ya 20 mer: Tm = 2 ° C × (A + T) + 4 ° C × (G + C).
■ Wakati utangulizi ni zaidi ya 20 mer: Tm = 81.5 + 0.41 × (GC%) - 600 / L, ambapo L ni urefu wa utangulizi.
■ Weka joto linalounganisha saa (Tm-5) ° C.
Uingizaji wa Primer ya PCR
Mkusanyiko unaofaa wa mwisho wa primers unaweza kuchaguliwa kati ya 0.1 μM na 1.0 μM. Mkusanyiko wa kiwango cha chini sana husababisha mavuno ya chini ya bidhaa za kukuza, wakati mkusanyiko wa kiwango cha juu unakabiliwa na ukuzaji usio maalum. Kawaida, wakati kiasi cha templeti ya DNA ni kubwa au tata ya templeti ya DNA (kama DNA ya jenomu ya binadamu) inatumiwa kama kiolezo, mkusanyiko wa mwanzo unapaswa kuwa chini. Wakati kiasi cha templeti ya DNA ni ndogo au rahisi ya templeti ya DNA (kwa mfano, plasmid DNA, n.k.) inatumiwa kama kiolezo, mkusanyiko wa mwanzo unapaswa kuwa juu.
Bidhaa zote zinaweza kuboreshwa kwa ODM / OEM. Kwa maelezo,tafadhali bofya Huduma iliyoboreshwa (ODM / OEM)
  |
Tumia genomic DNA kama kiolezo kukuza kipande cha kb 1. Baada ya athari ya PCR, chukua 5 μl kwa kugundua electrophoresis. |
Kiolezo cha A-1
■ Kiolezo kina uchafu wa protini au vizuizi vya Taq, n.k. —Safisha templeti ya DNA, ondoa uchafu wa protini au dondoo la templeti na vifaa vya utakaso.
■ Uwekaji wa templeti haujakamilika - - Ongeza sawasawa joto la kujitolea na kuongeza muda wa kutengana.
■ Uharibifu wa kiolezo ——Tayarisha kiolezo.
Utangulizi wa A-2
Quality Ubora duni wa vichangamsha — -Tengeneza upya kitangulizi.
■ Uharibifu wa vianzio - —Pokea viwango vya juu vya mkusanyiko kuwa kiasi kidogo cha kuhifadhi. Epuka kufungia na kuyeyusha au muda mrefu wa 4 ° C iliyohifadhiwa.
■ Ubunifu usiofaa wa vichungi (k.v.
Mg-3 Mg2+mkusanyiko
■ Mg2+ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.
Joto la A-4 la kujifunga
■ Joto la juu la kuambatisha huathiri kumfunga primer na templeti. - Punguza joto linalounganisha na kuongeza hali hiyo kwa gradient ya 2 ° C.
Wakati wa ugani wa -5
■ Muda mfupi wa ugani - - Ongeza muda wa ugani.
Phenomena: Sampuli hasi pia zinaonyesha bendi za mlolongo wa lengo.
Uchafuzi wa A-1 wa PCR
■ Uchafuzi wa msalaba wa mlolongo wa shabaha au bidhaa za kukuza —— Kwa uangalifu usiweke bomba sampuli iliyo na mlolongo wa shabaha kwenye sampuli hasi au umwagike nje ya bomba la centrifuge. Vitendanishi au vifaa vinapaswa kuchomwa moto ili kuondoa asidi za kiini zilizopo, na uwepo wa uchafuzi unapaswa kuamua kupitia majaribio mabaya ya kudhibiti.
■ Ukolezi wa vitendanishi - —Pokea vitendanishi na uvihifadhi kwa joto la chini.
A-2 Mkuur
■ Mg2+ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.
■ Ubunifu wa vianzio visivyo sahihi, na mlolongo wa malengo una homolojia na mlolongo usiolenga. —- Tengeneza upya viboreshaji.
Phenomena: Bendi za kukuza PCR haziendani na saizi inayotarajiwa, iwe kubwa au ndogo, au wakati mwingine bendi zote za kukuza na bendi zisizo maalum za kukuza hufanyika.
Utangulizi wa A-1
■ Upendeleo duni wa mwanzo
- - Kubuni upya primer.
■ Mkusanyiko wa kiwango cha juu ni cha juu sana - - Ongeza vizuri joto la kutengana na kuongeza muda wa kutengana.
Mg-A-2 Mg2+ mkusanyiko
■ Mg2+ mkusanyiko ni mkubwa sana — -Punguza vizuri mkusanyiko wa Mg2 +: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.
A-3 polymerase inayoweza kutibika
■ Kiasi cha enzyme nyingi - - Punguza kiwango cha enzyme ipasavyo kwa vipindi vya 0.5 U.
Joto la A-4 la kujifunga
■ Joto la kufunika ni la chini sana — - Ongeza vizuri joto la kuambatanisha au tumia njia mbili za kuziba
Mizunguko ya PC-A-5
■ Mizunguko mingi sana ya PCR ——Punguza idadi ya mizunguko ya PCR.
Utangulizi wa A-1——Upekee wa umaskini ——Buni upya kitangulizi, badilisha msimamo na urefu wa kitangulizi ili kuongeza umaalum wake; au fanya PCR iliyohifadhiwa.
Kiini-2 cha DNA
——Template sio safi - -Takasa kiolezo au toa DNA na vifaa vya utakaso.
Mg-3 Mg2+ mkusanyiko
——Ma2+ mkusanyiko ni mkubwa sana -—Punguza ipasavyo Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.
A-4 dNTP
—— Mkusanyiko wa dNTP ni kubwa mno —— Punguza mkusanyiko wa dNTP ipasavyo
Joto la kujumlisha A-5
—— Joto la chini kabisa la kuambatisha —— Ongeza vizuri joto linalounganisha
Mzunguko wa A-6
——Mizunguko mingi sana —— Ongeza idadi ya mzunguko
Hatua ya kwanza ni kuchagua polymerase inayofaa. Taq polymerase ya kawaida haiwezi kusahihisha kwa sababu ya ukosefu wa shughuli ya msamaha ya 3'-5, na kutofanana kutapunguza sana ufanisi wa ugani wa vipande. Kwa hivyo, polymerase ya kawaida ya Taq haiwezi kukuza vyema vipande vya lengo kubwa kuliko 5 kb. Taq polymerase iliyo na muundo maalum au uaminifu mwingine wa hali ya juu inapaswa kuchaguliwa ili kuboresha ufanisi wa ugani na kukidhi mahitaji ya kukuza kipande kirefu. Kwa kuongezea, ukuzaji wa vipande virefu pia inahitaji marekebisho yanayolingana ya muundo wa mwanzo, muda wa kujitolea, muda wa ugani, pH ya bafa, nk Kawaida, viboreshaji vyenye 18-24 bp vinaweza kusababisha mavuno bora. Ili kuzuia uharibifu wa templeti, wakati wa kujitolea kwa 94 ° C unapaswa kupunguzwa hadi sekunde 30 au chini kwa kila mzunguko, na wakati wa kuongezeka kwa joto hadi 94 ° C kabla ya kukuza inapaswa kuwa chini ya dakika 1. Kwa kuongezea, kuweka joto la ugani kwa karibu 68 ° C na kubuni muda wa ugani kulingana na kiwango cha 1 kb / min kunaweza kuhakikisha ukuzaji mzuri wa vipande virefu.
Kiwango cha makosa ya kukuza PCR inaweza kupunguzwa kwa kutumia polima nyingi za DNA na uaminifu wa hali ya juu. Miongoni mwa polima zote za Taq DNA zilizopatikana hadi sasa, enzyme ya Pfu ina kiwango cha chini kabisa cha makosa na uaminifu wa hali ya juu (angalia jedwali lililoambatanishwa). Mbali na uteuzi wa enzyme, watafiti wanaweza kupunguza zaidi kiwango cha mabadiliko ya PCR kwa kuboresha hali ya athari, pamoja na kuongeza muundo wa bafa, mkusanyiko wa polymerase inayoweza kutibika na kuongeza idadi ya mzunguko wa PCR.
Makundi ya bidhaa
KWANINI TUCHAGUE
Tangu kuanzishwa kwake, kiwanda chetu kimekuwa kikitengeneza bidhaa za darasa la kwanza na kufuata kanuni hiyo
ya ubora kwanza. Bidhaa zetu zimepata sifa bora katika tasnia na kudhaminiwa kwa thamani kati ya wateja wapya na wa zamani ..
- Simu: +86 010-59822688
- Jengo la 5, Nambari 86, Shuangying West Road, Wilaya ya Changping, Beijing.
- watu@tiangen.com
