2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ

Mbele ya PCR ya haraka na ufanisi mkubwa na upinzani mkubwa wa mafadhaiko.

2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ ni toleo jipya la kuboreshwa na kuboreshwa tayari kutumia 2 × PCR na sehemu zote muhimu katika athari ya PCR isipokuwa templeti ya DNA na vitangulizi.

Paka. Hapana	Ukubwa wa Ufungashaji
4993001	1ml
4993002	5x1ml
4992912	20x5x1 ml
4992913	5 × 1ml
4992920	20 × 5 × 1ml
4992921	20 × 5 × 1ml

Tuma barua pepe kwetu

Maelezo ya Bidhaa

Mfano wa Majaribio

Maswali Yanayoulizwa Sana

Vitambulisho vya Bidhaa

Vipengele

■ Ufanisi mkubwa wa kukuza: Vipande vya DNA vya saizi tofauti (chini ya 5 kb) na vyanzo vinaweza kukuzwa vyema.
■ Usikivu wa juu: Kiasi cha chini cha pg 10 ya vipande vinavyolengwa vinaweza kukuzwa kutoka kwa templeti za genomiki.
■ Upinzani mkubwa wa mafadhaiko: Kwa templeti zilizo na uchafu mwingi kama vile templeti / tamaduni ya bakteria, kipande cha lengo kinaweza kukuzwa kwa urahisi. Shughuli ya polymerase haitaathiriwa na kufungia mara kwa mara na kuyeyuka.
■ Urahisi kwa matumizi: Mfumo wa athari uliandaliwa kwa urahisi na haraka. Kipande kilichoimarishwa kina mwisho wa 3 "dA-overhang, ambayo ni rahisi kwa uundaji wa TA.

Ufafanuzi

Aina: Taq DNA polymerase
Mfano: Kiolezo kilichosafishwa / kilichokatwa vibaya / utamaduni wa bakteria
Kiolezo: > 10 uk
Ukubwa wa vipande: <5 kb
Maombi: Ukuzaji wa PCR wa vipande vya DNA, uandikishaji wa DNA, ugani wa kwanza, uamuzi wa mlolongo, ugunduzi mkubwa wa jeni, majaribio ya nusu ya idadi ya PCR, kugundua DNA ya ufuatiliaji, nk.

Bidhaa zote zinaweza kuboreshwa kwa ODM / OEM. Kwa maelezo,tafadhali bofya Huduma iliyoboreshwa (ODM / OEM)

Iliyotangulia: Mchanganyiko wa PCR 2-tajiri wa GC

Ifuatayo: Mfumo wa Dhahabu Rahisi wa PCR (na rangi)

Kielelezo 1. Violezo kutoka vyanzo tofauti viliongezewa na TIANGEN Taq MasterMix II na Mchanganyiko wa kawaida wa Taq kutoka kwa Supplier TR mtawaliwa kugundua upinzani wa mafadhaiko ya vitendanishi. Matokeo yanaonyesha kuwa bidhaa za TIANGEN zinaweza kukuza vipande vya shabaha kutoka kwa templeti mbichi za jenomiki na utamaduni wa bakteria, na upinzani wa mafadhaiko ni bora kuliko ule wa muuzaji TR. J: Kiolezo kibovu cha genomic kilichotolewa na TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit. Prp / DN: Uchimbaji machafu na kugundua sampuli za damu ya binadamu. Mchele: Uchimbaji machafu na kugundua sampuli za mchele. B: Ukoloni PCR. Sehemu ya PCR ni 700 bp.
M: TIANGEN Alama ya III

Ulimwengu mzuri wa templeti kutoka vyanzo tofauti na kwa urefu tofauti
Kielelezo 2. Vipande vya vyanzo na urefu tofauti viliongezwa kwa kutumia TIANGEN Taq MasterMix II (A) na kawaida Taq Mchanganyiko wa Wasambazaji TK (B), Muuzaji TR (C), Muuzaji V (D) na Muuzaji G (E) mtawaliwa. Matokeo yanaonyesha kuwa utendaji kamili wa bidhaa za TIANGEN ni bora kwa suala la uwezo wa kukuza, upekee na ulimwengu.

2-3: Kiolezo cha mchele wa DNA ya mchele (694 bp, 2258 bp);

4: Kiolezo cha DNA ya jeni ya pamba (200 bp);

5: Escherichia coli templeti ya genomic DNA (2298 bp);

6-7: Kiolezo cha DNA ya genome ya kipanya (1 kb, 2 kb);

8-10: Kiolezo cha panya cha genomic DNA (1 kb, 2 kb, 2080 bp);

11-18: Kiolezo cha DNA ya genome ya binadamu (300 bp, 448 bp (GC%: 74.8%), 1100 bp, 750 bp,

1000 bp, 1090 bp (GC%: 70.4%), 2 kb, 4 kb)

Usikivu mkubwa
Kielelezo 3. Viwango tofauti vya panya na vipande vya DNA vya binadamu viliongezwa kwa kutumia TIANGEN Taq MasterMix II (A), kawaida Taq Mchanganyiko wa Muuzaji V (B) na Msaidizi TK (C), mtawaliwa, kugundua unyeti wa kukuza. Matokeo yanaonyesha kuwa bidhaa ya TIANGEN inaweza kukuza kipande cha shabaha kutoka kwa templeti ya genome chini hadi 0.01 ng, na unyeti wake ni bora kuliko ule wa bidhaa kutoka kwa Muuzaji V na TK.M: TIANGEN Marker III, N: NT : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 10 ng, 1 ng, 0.1 ng, 0.01 ng.

Swali: Hakuna bendi za kukuza

Kiolezo cha A-1

■ Kiolezo kina uchafu wa protini au vizuizi vya Taq, n.k. —Safisha templeti ya DNA, ondoa uchafu wa protini au dondoo la templeti na vifaa vya utakaso.

■ Uwekaji wa templeti haujakamilika - - Ongeza sawasawa joto la kujitolea na kuongeza muda wa kutengana.

■ Uharibifu wa kiolezo ——Tayarisha kiolezo.

Utangulizi wa A-2

Quality Ubora duni wa vichangamsha — -Tengeneza upya kitangulizi.

■ Uharibifu wa vianzio - —Pokea viwango vya juu vya mkusanyiko kuwa kiasi kidogo cha kuhifadhi. Epuka kufungia na kuyeyusha au muda mrefu wa 4 ° C iliyohifadhiwa.

■ Ubunifu usiofaa wa vichungi (k.v.

Mg-3 Mg²⁺mkusanyiko

■ Mg²⁺ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg²⁺mkusanyiko: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

Joto la A-4 la kujifunga

■ Joto la juu la kuambatisha huathiri kumfunga primer na templeti. - Punguza joto linalounganisha na kuongeza hali hiyo kwa gradient ya 2 ° C.

Wakati wa ugani wa -5

■ Muda mfupi wa ugani - - Ongeza muda wa ugani.

Swali: Chanya ya uwongo

Phenomena: Sampuli hasi pia zinaonyesha bendi za mlolongo wa lengo.

Uchafuzi wa A-1 wa PCR

■ Uchafuzi wa msalaba wa mlolongo wa shabaha au bidhaa za kukuza —— Kwa uangalifu usiweke bomba sampuli iliyo na mlolongo wa shabaha kwenye sampuli hasi au umwagike nje ya bomba la centrifuge. Vitendanishi au vifaa vinapaswa kuchomwa moto ili kuondoa asidi za kiini zilizopo, na uwepo wa uchafuzi unapaswa kuamua kupitia majaribio mabaya ya kudhibiti.

■ Ukolezi wa vitendanishi - —Pokea vitendanishi na uvihifadhi kwa joto la chini.

A-2 Mkuur

■ Mg²⁺ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg²⁺ mkusanyiko: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

■ Ubunifu wa vianzio visivyo sahihi, na mlolongo wa malengo una homolojia na mlolongo usiolenga. —- Tengeneza upya viboreshaji.

Swali: Ukuzaji usio maalum

Phenomena: Bendi za kukuza PCR haziendani na saizi inayotarajiwa, iwe kubwa au ndogo, au wakati mwingine bendi zote za kukuza na bendi zisizo maalum za kukuza hufanyika.

Utangulizi wa A-1

■ Upendeleo duni wa mwanzo

- - Kubuni upya primer.

■ Mkusanyiko wa kiwango cha juu ni cha juu sana - - Ongeza vizuri joto la kutengana na kuongeza muda wa kutengana.

Mg-A-2 Mg²⁺ mkusanyiko

■ Mg²⁺ mkusanyiko ni mkubwa sana — -Punguza vizuri mkusanyiko wa Mg2 +: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

A-3 polymerase inayoweza kutibika

■ Kiasi cha enzyme nyingi - - Punguza kiwango cha enzyme ipasavyo kwa vipindi vya 0.5 U.

Joto la A-4 la kujifunga

■ Joto la kufunika ni la chini sana — - Ongeza vizuri joto la kuambatanisha au tumia njia mbili za kuziba

Mizunguko ya PC-A-5

■ Mizunguko mingi sana ya PCR ——Punguza idadi ya mizunguko ya PCR.

Swali: Patchy au smear bendi

Utangulizi wa A-1——Upekee wa umaskini ——Buni upya kitangulizi, badilisha msimamo na urefu wa kitangulizi ili kuongeza umaalum wake; au fanya PCR iliyohifadhiwa.

Kiini-2 cha DNA

——Template sio safi - -Takasa kiolezo au toa DNA na vifaa vya utakaso.

Mg-3 Mg²⁺ mkusanyiko

——Ma²⁺ mkusanyiko ni mkubwa sana -—Punguza ipasavyo Mg²⁺ mkusanyiko: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

A-4 dNTP

—— Mkusanyiko wa dNTP ni kubwa mno —— Punguza mkusanyiko wa dNTP ipasavyo

Joto la kujumlisha A-5

—— Joto la chini kabisa la kuambatisha —— Ongeza vizuri joto linalounganisha

Mzunguko wa A-6

——Mizunguko mingi sana —— Ongeza idadi ya mzunguko

Swali: Kiasi kipi cha DNA kinapaswa kuongezwa katika mfumo wa mmenyuko wa PCR 50 μl?

Swali: Jinsi ya kukuza vipande virefu?

Hatua ya kwanza ni kuchagua polymerase inayofaa. Taq polymerase ya kawaida haiwezi kusahihisha kwa sababu ya ukosefu wa shughuli ya msamaha ya 3'-5, na kutofanana kutapunguza sana ufanisi wa ugani wa vipande. Kwa hivyo, polymerase ya kawaida ya Taq haiwezi kukuza vyema vipande vya lengo kubwa kuliko 5 kb. Taq polymerase iliyo na muundo maalum au uaminifu mwingine wa hali ya juu inapaswa kuchaguliwa ili kuboresha ufanisi wa ugani na kukidhi mahitaji ya kukuza kipande kirefu. Kwa kuongezea, ukuzaji wa vipande virefu pia inahitaji marekebisho yanayolingana ya muundo wa mwanzo, muda wa kujitolea, muda wa ugani, pH ya bafa, nk Kawaida, viboreshaji vyenye 18-24 bp vinaweza kusababisha mavuno bora. Ili kuzuia uharibifu wa templeti, wakati wa kujitolea kwa 94 ° C unapaswa kupunguzwa hadi sekunde 30 au chini kwa kila mzunguko, na wakati wa kuongezeka kwa joto hadi 94 ° C kabla ya kukuza inapaswa kuwa chini ya dakika 1. Kwa kuongezea, kuweka joto la ugani kwa karibu 68 ° C na kubuni muda wa ugani kulingana na kiwango cha 1 kb / min kunaweza kuhakikisha ukuzaji mzuri wa vipande virefu.

Swali: Jinsi ya kuboresha uaminifu wa kukuza PCR?

Kiwango cha makosa ya kukuza PCR inaweza kupunguzwa kwa kutumia polima nyingi za DNA na uaminifu wa hali ya juu. Miongoni mwa polima zote za Taq DNA zilizopatikana hadi sasa, enzyme ya Pfu ina kiwango cha chini kabisa cha makosa na uaminifu wa hali ya juu (angalia jedwali lililoambatanishwa). Mbali na uteuzi wa enzyme, watafiti wanaweza kupunguza zaidi kiwango cha mabadiliko ya PCR kwa kuboresha hali ya athari, pamoja na kuongeza muundo wa bafa, mkusanyiko wa polymerase inayoweza kutibika na kuongeza idadi ya mzunguko wa PCR.

Andika ujumbe wako hapa na ututumie