Kitengo cha PC cha Ultra HiFidelity

Uaminifu wa hali ya juu, utaalam wa hali ya juu na ufanisi wa hali ya juu ya kuanza kwa moto wa PCR.

Ultra HiFidelity PCR Kit ni kiambatisho kipya cha kuongeza nguvu kwa uaminifu wa PCR inayofaa kwa uundaji na kugundua inayohusiana na PCR. Ultra HiFi DNA Polymerase iliyo kwenye kit ni mpya na ya uaminifu wa juu wa polymerase ya DNA iliyoundwa na teknolojia ya mageuzi ya Masi. Inaboresha ushirika wa DNA polymerase kwa templeti, inaboresha kasi ya kukuza na uwezo wa ugani wa enzyme, na huongeza kiwango cha mafanikio ya PCR na mavuno ya bidhaa.

Paka. Hapana	Ukubwa wa Ufungashaji
4992970	1ml
4992971	5 * 1ml
4992978	5 * 5 * 1ml

Tuma barua pepe kwetu

Maelezo ya Bidhaa

Mfano wa Majaribio

Maswali Yanayoulizwa Sana

Vitambulisho vya Bidhaa

Vipengele

■ Rahisi kufanya kazi: Kiti hiki hutolewa kama 2 × premix, na PCR inaweza kufanywa kwa kuongeza tu templeti na vichocheo.
■ Uaminifu wa hali ya juu: Uaminifu ni mara 50 ya ile ya Taq polymerase.
■ Ubora wa hali ya juu: Utendaji bora wa kuanza-moto ili kuhakikisha umaalum wa bidhaa ..
■ Ukuzaji wa haraka: Kasi ya ugani inaweza kufikia sekunde 10-15 / kb.
■ Upanukaji wenye nguvu: Hadi vipande 20 vya DNA vinaweza kukuzwa.
■ Utumiaji pana: Kiti ina Kiboreshaji cha PCR na inafaa kwa ukuzaji wa GC kubwa na templeti ngumu.

Ufafanuzi

Aina: Uaminifu wa juu wa DNA Polymerase
Kasi ya kuongeza kasi: 10-15 sec / kb
Ukubwa wa vipande: <20kb
Maombi: Kuinua kiwango cha juu cha uaminifu wa PCR, ujumuishaji wa jeni, ukuzaji wa juu wa kiolezo cha GC, ujumuishaji wa jeni ya genomes tata, utaftaji wa juu wa uaminifu wa cDNA, kugundua SNP, mabadiliko maalum ya wavuti, n.k.
Uchimbaji wa DNA kutoka kwa Tishu Mbalimbali za Mimea:
Kumbuka: Mavuno ya DNA hutegemea aina za sampuli. Vifaa vyote hapo juu ni kutoka kwa majani laini.

Bidhaa zote zinaweza kuboreshwa kwa ODM / OEM. Kwa maelezo,tafadhali bofya Huduma iliyoboreshwa (ODM / OEM)

Iliyotangulia: 2 × Pfu PCR Mchanganyiko

Ifuatayo: Kitengo cha RT cha QuantScript

	Anza moto kuhakikisha utaalam wa bidhaa Kielelezo 1. Ultra HiFi ina kazi bora ya kuanza-moto ili kuhakikisha upekee wa bidhaa za kukuza. Njia ya beacons ya Masi ilitumika (Ma et al., Anal Biochem, 2006).
	Uaminifu bora wa juu, mara 50 juu kuliko Taq Polymerase Kielelezo 2. Uaminifu wa Ultra HiFi ni mara 50 zaidi kuliko ile ya kawaida ya Taq polymerase. Uaminifu wa upolimishaji wa Taq polymerase (bila shughuli za kurekebisha) hutumiwa kama kumbukumbu.
	Ukuzaji wa haraka na vipande virefu vinaweza kukuzwa haraka Mtini. 3. Hi Hi inaweza kupanua hadi sekunde 5 / kb kwa vipande vidogo kuliko 4 kb. Kwa vipande virefu, wakati wa kukuza unaweza kupanuliwa ipasavyo. Kwa vipande zaidi ya 15 kb, kiwango cha kasi inaweza kuwa hadi 30 sec / kb. M: Alama ya TIANGEN D15000
	Ulimwengu wenye nguvu na upeo wa hali ya juu, rahisi kusoma GC ya juu na vipande virefu kutoka vyanzo tofauti Kielelezo 4. Ultra HiFi ina utaalam wa hali ya juu ili kuhakikisha kiwango cha mafanikio ya kukuza na idadi ya bidhaa kwa aina tofauti za templeti. A. Matokeo ya kukuza Hi Hi Matokeo ya kukuza enzyme ya Hi-Fi ya Muuzaji K C. Matokeo ya kukuza enzyme ya Hi-Fi ya Muuzaji N M: Alama ya TIANGEN D15000 Mstari wa 1-5. Matokeo ya kukuza ya templeti zilizo na urefu tofauti: 1. 750 bp; 2. 1 kb; 3. 2 kb; 4. 4 kb; 5. 6 kb Njia 6. Matokeo ya ukuzaji wa templeti ya hali ya juu ya GC: 1915 bp (GC%: 70%); Njia 7-11. Matokeo ya kukuza ya templeti 2 za kb kutoka kwa genome anuwai: 7. Panya; 8. Mchele; 9. Ngano; 10. Mahindi; 11. Bakteria; Mstari wa 12-14. 8 kb matokeo ya kukuza kipande cha muda mrefu: 12. Mchele; 13. Mahindi;

Swali: Hakuna bendi za kukuza

Kiolezo cha A-1

■ Kiolezo kina uchafu wa protini au vizuizi vya Taq, n.k. —Safisha templeti ya DNA, ondoa uchafu wa protini au dondoo la templeti na vifaa vya utakaso.

■ Uwekaji wa templeti haujakamilika - - Ongeza sawasawa joto la kujitolea na kuongeza muda wa kutengana.

■ Uharibifu wa kiolezo ——Tayarisha kiolezo.

Utangulizi wa A-2

Quality Ubora duni wa vichangamsha — -Tengeneza upya kitangulizi.

■ Uharibifu wa vianzio - —Pokea viwango vya juu vya mkusanyiko kuwa kiasi kidogo cha kuhifadhi. Epuka kufungia na kuyeyusha au muda mrefu wa 4 ° C iliyohifadhiwa.

■ Ubunifu usiofaa wa vichungi (k.v.

Mg-3 Mg²⁺mkusanyiko

■ Mg²⁺ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg²⁺mkusanyiko: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

Joto la A-4 la kujifunga

■ Joto la juu la kuambatisha huathiri kumfunga primer na templeti. - Punguza joto linalounganisha na kuongeza hali hiyo kwa gradient ya 2 ° C.

Wakati wa ugani wa -5

■ Muda mfupi wa ugani - - Ongeza muda wa ugani.

Swali: Chanya ya uwongo

Phenomena: Sampuli hasi pia zinaonyesha bendi za mlolongo wa lengo.

Uchafuzi wa A-1 wa PCR

■ Uchafuzi wa msalaba wa mlolongo wa shabaha au bidhaa za kukuza —— Kwa uangalifu usiweke bomba sampuli iliyo na mlolongo wa shabaha kwenye sampuli hasi au umwagike nje ya bomba la centrifuge. Vitendanishi au vifaa vinapaswa kuchomwa moto ili kuondoa asidi za kiini zilizopo, na uwepo wa uchafuzi unapaswa kuamua kupitia majaribio mabaya ya kudhibiti.

■ Ukolezi wa vitendanishi - —Pokea vitendanishi na uvihifadhi kwa joto la chini.

A-2 Mkuur

■ Mg²⁺ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg²⁺ mkusanyiko: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

■ Ubunifu wa vianzio visivyo sahihi, na mlolongo wa malengo una homolojia na mlolongo usiolenga. —- Tengeneza upya viboreshaji.

Swali: Ukuzaji usio maalum

Phenomena: Bendi za kukuza PCR haziendani na saizi inayotarajiwa, iwe kubwa au ndogo, au wakati mwingine bendi zote za kukuza na bendi zisizo maalum za kukuza hufanyika.

Utangulizi wa A-1

■ Upendeleo duni wa mwanzo

- - Kubuni upya primer.

■ Mkusanyiko wa kiwango cha juu ni cha juu sana - - Ongeza vizuri joto la kutengana na kuongeza muda wa kutengana.

Mg-A-2 Mg²⁺ mkusanyiko

■ Mg²⁺ mkusanyiko ni mkubwa sana — -Punguza vizuri mkusanyiko wa Mg2 +: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

A-3 polymerase inayoweza kutibika

■ Kiasi cha enzyme nyingi - - Punguza kiwango cha enzyme ipasavyo kwa vipindi vya 0.5 U.

Joto la A-4 la kujifunga

■ Joto la kufunika ni la chini sana — - Ongeza vizuri joto la kuambatanisha au tumia njia mbili za kuziba

Mizunguko ya PC-A-5

■ Mizunguko mingi sana ya PCR ——Punguza idadi ya mizunguko ya PCR.

Swali: Patchy au smear bendi

Utangulizi wa A-1——Upekee wa umaskini ——Buni upya kitangulizi, badilisha msimamo na urefu wa kitangulizi ili kuongeza umaalum wake; au fanya PCR iliyohifadhiwa.

Kiini-2 cha DNA

——Template sio safi - -Takasa kiolezo au toa DNA na vifaa vya utakaso.

Mg-3 Mg²⁺ mkusanyiko

——Ma²⁺ mkusanyiko ni mkubwa sana -—Punguza ipasavyo Mg²⁺ mkusanyiko: Boresha Mg²⁺ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo²⁺ mkusanyiko kwa kila template na primer.

A-4 dNTP

—— Mkusanyiko wa dNTP ni kubwa mno —— Punguza mkusanyiko wa dNTP ipasavyo

Joto la kujumlisha A-5

—— Joto la chini kabisa la kuambatisha —— Ongeza vizuri joto linalounganisha

Mzunguko wa A-6

——Mizunguko mingi sana —— Ongeza idadi ya mzunguko

Swali: Kiasi kipi cha DNA kinapaswa kuongezwa katika mfumo wa mmenyuko wa PCR 50 μl?

Swali: Jinsi ya kukuza vipande virefu?

Hatua ya kwanza ni kuchagua polymerase inayofaa. Taq polymerase ya kawaida haiwezi kusahihisha kwa sababu ya ukosefu wa shughuli ya msamaha ya 3'-5, na kutofanana kutapunguza sana ufanisi wa ugani wa vipande. Kwa hivyo, polymerase ya kawaida ya Taq haiwezi kukuza vyema vipande vya lengo kubwa kuliko 5 kb. Taq polymerase iliyo na muundo maalum au uaminifu mwingine wa hali ya juu inapaswa kuchaguliwa ili kuboresha ufanisi wa ugani na kukidhi mahitaji ya kukuza kipande kirefu. Kwa kuongezea, ukuzaji wa vipande virefu pia inahitaji marekebisho yanayolingana ya muundo wa mwanzo, muda wa kujitolea, muda wa ugani, pH ya bafa, nk Kawaida, viboreshaji vyenye 18-24 bp vinaweza kusababisha mavuno bora. Ili kuzuia uharibifu wa templeti, wakati wa kujitolea kwa 94 ° C unapaswa kupunguzwa hadi sekunde 30 au chini kwa kila mzunguko, na wakati wa kuongezeka kwa joto hadi 94 ° C kabla ya kukuza inapaswa kuwa chini ya dakika 1. Kwa kuongezea, kuweka joto la ugani kwa karibu 68 ° C na kubuni muda wa ugani kulingana na kiwango cha 1 kb / min kunaweza kuhakikisha ukuzaji mzuri wa vipande virefu.

Swali: Jinsi ya kuboresha uaminifu wa kukuza PCR?

Kiwango cha makosa ya kukuza PCR inaweza kupunguzwa kwa kutumia polima nyingi za DNA na uaminifu wa hali ya juu. Miongoni mwa polima zote za Taq DNA zilizopatikana hadi sasa, enzyme ya Pfu ina kiwango cha chini kabisa cha makosa na uaminifu wa hali ya juu (angalia jedwali lililoambatanishwa). Mbali na uteuzi wa enzyme, watafiti wanaweza kupunguza zaidi kiwango cha mabadiliko ya PCR kwa kuboresha hali ya athari, pamoja na kuongeza muundo wa bafa, mkusanyiko wa polymerase inayoweza kutibika na kuongeza idadi ya mzunguko wa PCR.

Andika ujumbe wako hapa na ututumie