Kitambaa cha kipanya cha PCR Kit

Ukuzaji wa haraka wa jeni lengwa moja kwa moja kutoka kwa sampuli za tishu za wanyama bila uchimbaji.

Kitambaa cha Panya cha PCR moja kwa moja kinachukua muundo wa kipekee wa ufungaji ambao unajumuisha vitendanishi vyote vya utayarishaji wa haraka wa genomic DNA na ukuzaji wa PCR. Inatumika kwa utakaso wa DNA ya hatua moja ya genome kutoka kwa tishu za panya (mkia, sikio na kidole) na ukuzaji na kugundua PCR inayofuata. Mchakato wote haujumuishi homogenization, smashing, digestion ya usiku mmoja, uchimbaji wa kutengenezea kikaboni, mvua ya ethanoli au hatua za kusafisha safu. Matokeo thabiti yanaweza kupatikana na shughuli rahisi na za haraka.

2 × Dir PCR MasterMix iliyotolewa na kit hiki ni reagent inayofanana ya PCR ambayo inaweza kwa ufanisi na haswa kukuza DNA bila hitaji la kuondoa uchafu kama protini. Reagent hii ina kingamwili iliyobadilishwa moto-kuanzaTaq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, bafa, pamoja na kiboreshaji, kiboreshaji na kiimarishaji cha athari ya PCR. Mmenyuko wa PCR unaweza kufanywa kwa kuongeza tu kwenye templeti iliyochukuliwa takriban na vichocheo maalum. Mchakato wote ni wa haraka, rahisi, nyeti, maalum na thabiti, ambayo inafaa sana kwa uchunguzi wa hali ya juu. 2 × Dir PCR MasterMix ina rangi ya premix electrophoresis, ili bidhaa za PCR ziweze kutumwa moja kwa moja kwa kugundua electrophoresis baada ya athari. Mwisho wa 3 wa bidhaa ya PCR ina A-tailing, ambayo inaweza kutumika kwa uundaji wa TA.

Paka. Hapana Ukubwa wa Ufungashaji
4992531 20 ×l × 50 rxn
4992532 20 ×l × 200 rxn

Maelezo ya Bidhaa

Utiririshaji wa kazi

Mfano wa Majaribio

Maswali Yanayoulizwa Sana

Vitambulisho vya Bidhaa

Vipengele

■ Rahisi na ya haraka: DNA ya Genomic inaweza kutolewa haraka kutoka kwa tishu za panya kwa dakika 60 bila kusaga naitrojeni kioevu na uchimbaji wa vimumunyisho vya kikaboni.
■ Utumiaji mpana: Inafaa kwa uchimbaji wa hatua moja ya DNA ya jenomu kutoka kwa mkia wa panya, sikio, kidole na tishu zingine.
■ Ubora wa hali ya juu: Taq polymerase inayotumiwa katika bidhaa hii ni kingamwili iliyobadilishwa-enzyme ya kuanza-moto, na kiolezo cha hali ya juu na mshikamano wa utangulizi na upeo wa ukuzaji, ambayo inafaa haswa kwa utaftaji wa genotyping na kitambulisho cha transgenic.
■ Ugunduzi wa jeni: Bidhaa hiyo ni rahisi kufanya kazi na matokeo ya kuaminika, na inafaa sana kwa uchambuzi wa hali ya juu na kugundua tishu za panya.

Bidhaa zote zinaweza kuboreshwa kwa ODM / OEM. Kwa maelezo,tafadhali bofya Huduma iliyoboreshwa (ODM / OEM)


  • Iliyotangulia:
  • Ifuatayo:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×

    Workflow

    Experimental Example

    Kutumia Kitambaa cha Panya cha moja kwa moja cha Panya na bidhaa inayofaa kutoka kwa muuzaji A kukuza 1000 bp, 2000 bp na vipande 3000 bp kutoka mkia wa panya, sikio la panya na mkia wa panya mtawaliwa. Matokeo yalionyesha kuwa Kitambaa cha Panya cha PCR Kit moja kwa moja kina kiwango bora na kiwango cha mafanikio.

    Swali: Hakuna bendi za kukuza

    Kiolezo cha A-1

    ■ Kiolezo kina uchafu wa protini au vizuizi vya Taq, n.k. —Safisha templeti ya DNA, ondoa uchafu wa protini au dondoo la templeti na vifaa vya utakaso.

    ■ Uwekaji wa templeti haujakamilika - - Ongeza sawasawa joto la kujitolea na kuongeza muda wa kutengana.

    ■ Uharibifu wa kiolezo ——Tayarisha kiolezo.

    Utangulizi wa A-2

    Quality Ubora duni wa vichangamsha — -Tengeneza upya kitangulizi.

    ■ Uharibifu wa vianzio - —Pokea viwango vya juu vya mkusanyiko kuwa kiasi kidogo cha kuhifadhi. Epuka kufungia na kuyeyusha au muda mrefu wa 4 ° C iliyohifadhiwa.

    ■ Ubunifu usiofaa wa vichungi (k.v.

    Mg-3 Mg2+mkusanyiko

    ■ Mg2+ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    Joto la A-4 la kujifunga

    ■ Joto la juu la kuambatisha huathiri kumfunga primer na templeti. - Punguza joto linalounganisha na kuongeza hali hiyo kwa gradient ya 2 ° C.

    Wakati wa ugani wa -5

    ■ Muda mfupi wa ugani - - Ongeza muda wa ugani.

    Swali: Chanya ya uwongo

    Phenomena: Sampuli hasi pia zinaonyesha bendi za mlolongo wa lengo.

    Uchafuzi wa A-1 wa PCR

    ■ Uchafuzi wa msalaba wa mlolongo wa shabaha au bidhaa za kukuza —— Kwa uangalifu usiweke bomba sampuli iliyo na mlolongo wa shabaha kwenye sampuli hasi au umwagike nje ya bomba la centrifuge. Vitendanishi au vifaa vinapaswa kuchomwa moto ili kuondoa asidi za kiini zilizopo, na uwepo wa uchafuzi unapaswa kuamua kupitia majaribio mabaya ya kudhibiti.

    ■ Ukolezi wa vitendanishi - —Pokea vitendanishi na uvihifadhi kwa joto la chini.

    A-2 Mkuur

    ■ Mg2+ mkusanyiko ni mdogo sana -— Ongeza Vizuri Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    ■ Ubunifu wa vianzio visivyo sahihi, na mlolongo wa malengo una homolojia na mlolongo usiolenga. —- Tengeneza upya viboreshaji.

    Swali: Ukuzaji usio maalum

    Phenomena: Bendi za kukuza PCR haziendani na saizi inayotarajiwa, iwe kubwa au ndogo, au wakati mwingine bendi zote za kukuza na bendi zisizo maalum za kukuza hufanyika.

    Utangulizi wa A-1

    ■ Upendeleo duni wa mwanzo

    - - Kubuni upya primer.

    ■ Mkusanyiko wa kiwango cha juu ni cha juu sana - - Ongeza vizuri joto la kutengana na kuongeza muda wa kutengana.

    Mg-A-2 Mg2+ mkusanyiko

    ■ Mg2+ mkusanyiko ni mkubwa sana — -Punguza vizuri mkusanyiko wa Mg2 +: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    A-3 polymerase inayoweza kutibika

    ■ Kiasi cha enzyme nyingi - - Punguza kiwango cha enzyme ipasavyo kwa vipindi vya 0.5 U.

    Joto la A-4 la kujifunga

    ■ Joto la kufunika ni la chini sana — - Ongeza vizuri joto la kuambatanisha au tumia njia mbili za kuziba

    Mizunguko ya PC-A-5

    ■ Mizunguko mingi sana ya PCR ——Punguza idadi ya mizunguko ya PCR.

    Swali: Patchy au smear bendi

    Utangulizi wa A-1——Upekee wa umaskini ——Buni upya kitangulizi, badilisha msimamo na urefu wa kitangulizi ili kuongeza umaalum wake; au fanya PCR iliyohifadhiwa.

    Kiini-2 cha DNA

    ——Template sio safi - -Takasa kiolezo au toa DNA na vifaa vya utakaso.

    Mg-3 Mg2+ mkusanyiko

    ——Ma2+ mkusanyiko ni mkubwa sana -—Punguza ipasavyo Mg2+ mkusanyiko: Boresha Mg2+ mkusanyiko na safu ya athari kutoka 1 mM hadi 3 mM na muda wa 0.5 mM kuamua Mg mojawapo2+ mkusanyiko kwa kila template na primer.

    A-4 dNTP

    —— Mkusanyiko wa dNTP ni kubwa mno —— Punguza mkusanyiko wa dNTP ipasavyo

    Joto la kujumlisha A-5

    —— Joto la chini kabisa la kuambatisha —— Ongeza vizuri joto linalounganisha

    Mzunguko wa A-6

    ——Mizunguko mingi sana —— Ongeza idadi ya mzunguko

    Swali: Kiasi kipi cha DNA kinapaswa kuongezwa katika mfumo wa mmenyuko wa PCR 50 μl?
    ytry
    Swali: Jinsi ya kukuza vipande virefu?

    Hatua ya kwanza ni kuchagua polymerase inayofaa. Taq polymerase ya kawaida haiwezi kusahihisha kwa sababu ya ukosefu wa shughuli ya msamaha ya 3'-5, na kutofanana kutapunguza sana ufanisi wa ugani wa vipande. Kwa hivyo, polymerase ya kawaida ya Taq haiwezi kukuza vyema vipande vya lengo kubwa kuliko 5 kb. Taq polymerase iliyo na muundo maalum au uaminifu mwingine wa hali ya juu inapaswa kuchaguliwa ili kuboresha ufanisi wa ugani na kukidhi mahitaji ya kukuza kipande kirefu. Kwa kuongezea, ukuzaji wa vipande virefu pia inahitaji marekebisho yanayolingana ya muundo wa mwanzo, muda wa kujitolea, muda wa ugani, pH ya bafa, nk Kawaida, viboreshaji vyenye 18-24 bp vinaweza kusababisha mavuno bora. Ili kuzuia uharibifu wa templeti, wakati wa kujitolea kwa 94 ° C unapaswa kupunguzwa hadi sekunde 30 au chini kwa kila mzunguko, na wakati wa kuongezeka kwa joto hadi 94 ° C kabla ya kukuza inapaswa kuwa chini ya dakika 1. Kwa kuongezea, kuweka joto la ugani kwa karibu 68 ° C na kubuni muda wa ugani kulingana na kiwango cha 1 kb / min kunaweza kuhakikisha ukuzaji mzuri wa vipande virefu.

    Swali: Jinsi ya kuboresha uaminifu wa kukuza PCR?

    Kiwango cha makosa ya kukuza PCR inaweza kupunguzwa kwa kutumia polima nyingi za DNA na uaminifu wa hali ya juu. Miongoni mwa polima zote za Taq DNA zilizopatikana hadi sasa, enzyme ya Pfu ina kiwango cha chini kabisa cha makosa na uaminifu wa hali ya juu (angalia jedwali lililoambatanishwa). Mbali na uteuzi wa enzyme, watafiti wanaweza kupunguza zaidi kiwango cha mabadiliko ya PCR kwa kuboresha hali ya athari, pamoja na kuongeza muundo wa bafa, mkusanyiko wa polymerase inayoweza kutibika na kuongeza idadi ya mzunguko wa PCR.

    Andika ujumbe wako hapa na ututumie